МИКРОБИОЛОГИЯ
ХИМИЯ
Главная О компании Партнеры Контакты Новости
МикроБио
МикроБио

(495) 221-20-26
E-mail
Пароль регистрация
напомнить пароль


Новости

[ 05.03.2012 ]
TOS пропионатный агар


Сравнительный рост бифидобактерий и лактобацилл на RCM и TOS MUP агаре

TOS пропионатный агарTOS Propionate Agar Base, Кат.№1.00043.0500, производства Мерк, Германия (Merck KGaA)

Среда для подсчета бифидобактерий в молочных продуктах

Селективная среда TOS пропионатный агар в сочетании с селективной добавкой мупироцина лития (MUP) позволяет определять количество бифидобактерий в стартовых культурах и различных молочных продуктах таких, как ферментированное и неферментированное молоко, сухое молоко и детское питание. Рост других молочнокислых бактерий в значительной степени ингибируется, таким образом, нет необходимости подтверждать выросшие колонии бифидобактерий. Определение  бифидобактерий выполняется методом посева и подсчета на чашках Петри, которые инкубируются в анаэробных условиях при температуре 37оС. Состав среды полностью соответствует рекомендациям ИСО 29981/IDF 220:2010.

Принцип действия

Бифидобактерии – это грамположительные неспорообразующие анаэробные палочки. Комбинация пептона из казеина и дрожжевого экстракта является богатой питательной основой для отличного роста бифидобактерий. Добавленный в среду сульфат магния восстанавливает поврежденные клетки бифидобактерий. Сульфат аммония является источником азота, дигидрофосфат калия и гидрофосфат калия поддерживают буферность среды на уровне нейтрального значения рН. L-цистеин служит восстанавливающим агентом и поддерживает необходимые анаэробные условия в среде.

Галактоолигосахарид TOS является специфическим ростовым фактором для всех бифидобактерий, тогда как другие молочнокислые бактерии не могут утилизировать данный олигосахарид. В комбинации с пропионатом натрия, который в значительной степени ингибирует рост сопутствующей микрофлоры, TOS пропионатный агар является высокоселективной средой для выделения бифидобактерий.

Мупироцин лития ингибирует рост лактобацилл, лактококков, стрептококков и лейконостока, не влияя на рост бифидобактерий. Типичная микрофлора молока ингибируется мупироцином лития. Среда на основе TOS пропионатного агара и мупироцина лития является настолько селективной, что позволяет определять бифидобактерии без необходимости дальнейшего подтверждения.

Состав среды (г/л)

Пептон из казеина - 10,0; дрожжевой экстракт - 1,0; KH2PO4 - 3,0; K2HPO4 - 4,8; (NH4)2SO4 - 3,0; MgSO4*7H2O – 0,2;  L-цистеин - 0,5; пропионат натрия – 15; галактоолигосахарид TOS – 10; агар-агар – 15,0.

Приготовление среды

TOS Пропионатный агар (основа)

Растворить 62,5 г в 950 мл дистиллированной воды и нагреть в кипящей водяной  бане или текучим паром, с частым перемешиванием до полного растворения. Среда чувствительна к нагреванию, ее следует автоклавировать небольшими порциями. Например, 95 мл или 190 мл растворенной среды переносят в соответствующие флаконы и автоклавируют при 115оС в течение 15 минут. После этого среду быстро охлаждают до 48оС на водяной бане. После автоклавирования среда становится слегка матовой, однако это проходит при охлаждении до 48оС на водяной бане. Основа среды остается стабильной в течение 4 часов при нахождении в водяной бане при 48оС. рН среды: 6,7±0,2 при 25оС. Приготовленная среда желтоватого цвета, прозрачная.

MUP селективная добавка

Селективная добавка мупирацина лития поставляется в лиофилизированном виде (Кат.N1.00045.0010). Каждый флакончик содержит 25 мг мупирацина лития, рассчитанный на 500 мл TOS-MUP среды. Для приготовления селективной добавки необходимо добавить к флакончику 25 мл стерильной дистиллированной воды. Мягко перемешать до полного растворения осадка.

TOS-MUP агар

Внести в асептичных условиях 5 мл MUP селективной добавки к 95 мл основы среды (к 190 мл основы среды следует добавить 10 мл MUP селективной добавки). Среда находится в расплавленном виде на водяной бане при температуре 48оС. При внесении селективной добавки следует избегать образования воздушных пузырьков в среде, которые могут вызвать окисление среды. TOS-MUP агар содержит 50 мг/л мупирацина лития. После добавления мупирацина лития среду необходимо сразу же использовать.

Подготовка образца

Образцы для исследований готовят в соответствии с международными стандартами ИСО 8216/IDF122 (сухие молочные продукты) или ИСО 7889/IDF117 (йогурты). Каждый образец 10 г суспендируется в 90 мл разбавляющего раствора (0,25% концентрация раствора Рингера). Готовится серия десятикратных разведений на основе 0,25% раствора Рингера, температура раствора составляет 20оС. Следует избегать образования пузырьков воздуха при перемешивании, поскольку бифидобактерии погибают при контакте с кислородом воздуха. Для того, чтобы существенно снизить риск повреждения клеток бифидобактерий, время с момента приготовления первого разведения и до посева в агар не должно превышать 15 минут.

Метод посева в агар

Посев образца на среду TOS-MUP агар осуществляют методом глубинного посева. Для этого 1 мл образца или его десятикратного разведения переносят в пустую чашку Петри и смешивают с 15 мл среды, охлажденной до 48оС. При добавлении образца и среды стараются избегать захват пузырьков воздуха средой.

Инкубация

Сразу после затвердевания агара чашки переворачивают и инкубируют в анаэробных условиях (анаэростат Anaerojar в комплекте с газогенерирующими пакетами Anaerocult®-A для создания анаэробных условий) в течение 72±3 часов при температуре 37оС. Анаэробные условия следует контролировать, используя соответствующие индикаторы анаэробных условий (Anaerotest®).

Подсчет колоний

Все чашки до 300 колоний подсчитываются. Бифидобактерии растут на чашках в виде белых колоний с запахом уксусной кислоты. Морфология колоний может сильно различаться от чечевицеобразных до круглых колоний в агаре и от звездоподобных  до клевероподобных колоний на поверхности агара. Диаметр колоний составляет 1-4 мм.

Подтверждение колоний

Для подтверждения выросших колоний необходимо провести микроскопию. Бифидобактерии – это палочки неправильной формы, которые видны при х1000 кратном увеличении в фазово-контрастном микроскопе. Альтернативно можно также поставить фруктозо-6-фосфат фосфокетолазный тест с выросшими характерными колониями.

Результаты

Подсчитывают количество колоний бифидобактерий (белые колонии с запахом уксусной кислоты), выросших на TOS-MUP агаре, умножают на степень разведения образца и получают количество бифидобактерий в 1 г образца.

Хранение

Сухая питательная среда храниться при температуре от +15 до +25оС в сухом месте, в плотно закрытой упаковке и может использоваться до срока хранения, указанного на упаковке. Приготовленная основа среды стабильна в течение 3 месяцев при хранении от +2 до +8оС при хранении во флаконе (защищена от высыхания) и в темном месте. Селективная добавка после добавления воды стабильна в течение 2 недель при хранении в холодильнике  +2 до +8оС и в течение 3 месяцев при хранении при -20оС.

 

Контроль качества

Тест штаммы

Посевная доза, КОЕ/чашку Петри

Выход

Цвет колоний

Bifidobacterium animalis subspecies lactis ATCC 27536

50-150

≥ 70 %

белый

Bifidobacterium breve ATCC 15700

50-150

≥ 70 %

белый

Bifidobacterium longum ATCC 15707

50-150

≥ 70 %

белый

Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus ATCC11842

106-107

нет роста

-

Lactobacillus casei ATCC 393

106-107

нет роста

-

Streptococcus thermophilus DSM 20259

106-107

нет роста

-



МикроБио, (495) 221-20-26, info@mibio.ru Создание сайта Wilmark Design

Карта сайта  Яндекс.Метрика